Detección cuantitativa de la deposición de calosa en plasmodesmos y vasos conductores de muestras vegetales.
Leandro Ortega, Mattio Fernanda, Del Vas Mariana, Proyecto: 2023-PD-L01-I083 . Coordinador: Mariana Del Vas. División de Servicios Técnicos Especializados. Microscopía Confocal
La deposición de calosa en tejidos vegetales, se ha determinado de forma cualitativa a través de la tinción con azul de anilina y su observación por epifluorescencia, desde hace ya varios años. Ahora, la microscopía confocal y el análisis de imágenes digitales, abren la posibilidad de cuantificar este parámetro en forma semiautomática, usando el software de código abierto FIJI.
Problemas o necesidades que resuelve
La acumulación de calosa en plasmodesmos (Pd) y vasos de floema es un mecanismo de regulación de la difusión de moléculas entre células y como defensa contra la invasión de patógenos, que se ha observado en muchas especies vegetales. Es una respuesta primaria de defensa que se ha visto correlacionada con el nivel de resistencia de las plantas al ataque de patógenos, especialmente fúngicos.
Al ser un indicador tan significativo, la tinción de este polisacárido se ha convertido en una valiosa herramienta para evaluar su deposición y monitorear la permeabilidad de Pd asociada a diferentes condiciones fisiológicas, el cual es un carácter factible de ser utilizado en programas de mejoramiento.
Propuesta
Este Servicio Técnico Especializado, ofrece la posibilidad de cuantificar la deposición de calosa en tejidos vegetales, a través del análisis de imágenes de microscopía confocal de muestras teñidas con anilina azul, previamente fijadas y clarificadas.
Ventajas
- Es una técnica relativamente rápida.2. No necesita material fresco. Se puede hacer en muestras previamente fijadas y conservadas (idealmente en EtOH 70%) hasta por un año.3. Además de valores cuantitativos, permite obtener imágenes de alta calidad aptas para publicación.
Estado de avance de la tecnología
La tinción con azul de anilina para la obtención de imágenes por epifluorescencia o microscopía confocal ya se encuentra disponible para ser ofrecida como servicio. Se probó y se puso a punto, en plantas de maíz sanas y enfermas con MRCV (Mal de Río Cuarto Virus). Restan hacer ajustes del procesamiento digital y análisis en FIJI, para una óptima automatización de la cuantificación.
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Gastón Vaghi Medina, [email protected], INTA Córdoba, GERENCIA GESTIÓN DE LA INNOVACIÓN, [email protected], Coordinación Nacional de Relaciones Institucionales y Vinculación Tecnológica, Buenos Aires - Argentina
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