Disertante

Natalia Periolo

Resumen

La citometria de flujo emplea una metodología descriptiva y analítica para medir parámetros celulares de manera individual, célula a célula, pero con capacidad para obtenerlos de manera rápida (muchas células a la vez). Se basa en medir características de cada partícula en suspensión (principalmente celular), cuando se le incide un rayo de luz. La técnica necesita de un equipamiento sofisticado y relativamente complejo que combina un sistema lumínico (rayo de luz de tipo láser y combinación de espejos, filtros y cristales que llevan la señal luminosa hasta receptores fotomultiplicadores), un sistema fluídico (las células en suspensión e individualizadas, es decir, sin que se agrupen, se llevan por un circuito líquido a una cámara de flujo en la que se define un flujo laminar por el que una célula se sitúa de manera precisa y estable frente al rayo lumínico) y un sistema electrónico/informático (recoge, maneja y permite representar y cuantificar todos los parámetros recogidos) para la evaluación de los distintos parámetros lumínicos.

La citofluorimetría ha ido evolucionando en los últimos años hacía equipos con mayores potenciales o dedicados principalmente a aplicaciones concretas. Entre estas modificaciones citométricas con aplicabilidad diagnóstica se debe destacar la metodología Luminex®. Los “citofluorímetros” Luminex no miden células sino partículas (que por su tamaño se asemejan a “células pequeñas”) de intensidad variable de fluorescencia que contienen en la superficie moléculas de unión específica (anticuerpos, oligonucleótidos, etc) para las moléculas que se pretende medir. Esta metodología involucra el uso de tres áreas de especialidad específicas: detección de fluorescencia avanzada, manufactura de micro-esferas de precisión y conjugación covalente de reactivos a las microesferas. Con esta tecnología, los ensayos biológicos se llevan a cabo en la superficie de las microesferas. Una vez que el ensayo ha sido finalizado, se procesa la información en un analizador LUMINEX que combina láseres, óptica avanzada, sistema de fluidos y procesamiento digital de la señal para generar resultados en forma rápida y precisa.

La tecnología, Luminex MAP®, facilita la evaluación simultánea de múltiples analitos con la ventajas de poseer un mayor rendimiento, menor volumen de muestra y menor costo.

Bibliografía

• Macey MG. Flow Cytometry: Principles and Applications. Humana Press Incorporated, Totowa 2007.
• Fleisher TA, de Oliveira JB. Flow Cytometry. En: Rich RR edt. Clinical Immunology. Principles and practice. 3rd edition. Mosby Elsevier. 2008; 1435-1446.
• https://www.thermofisher.com/ar/es/home/life-science/protein-biology/protein-assays-analysis/luminex-multiplex-assays.html
• DuPont, N., Wang, K., Wadhwa, P., Culhane, J., Nelson, E., 2005. Validation and comparison of luminex multiplex cytokine analysis kits with ELISA: determinations of a panel of nine cytokines in clinical sample culture supernatants. J. Reprod. Immunol. 2, 175–191.